* Данный текст распознан в автоматическом режиме, поэтому может содержать ошибки

ВЕКТОРЫ НА ОСНОВЕ НИТЕВИДНЫх фАгОВ Векторы дефектные по репликации * вектары дэфектныя па рэплікацыі * replication defective vectors – векторы, сконструированные на основе вирусов, из которых удалены собственные гены, ответственные за репликацию. Размножение таких векторов возможно только в специальных «пакующих» линиях клеток или в присутствии клеток-хелперов (помощников). Векторы интегрирующие * вектары, якія інтэгруюцца * integration vectors – векторы, стабильно встраивающиеся в геном клетки хозяина. Это возможно благодаря наличию последовательностей нуклеотидов, гомологичных последовательностям геномной ДНК. В результате функционирования общей системы рекомбинации происходит объединение хромосомной и плазмидной ДНК интегрирующего вектора, которое приводит к стабильному включению всей векторной плазмиды в хромосому. Примером такого интегрирующего вектора служит плазмида pFH7 B. subtilis. Векторная плазмида содержит фрагмент ДНК умеренного бактериофага SP? и после попадания в клетки B. subtilis, лизогенные по данному бактериофагу, эффективно интегрируется в профаг. Плазмида содержит ген устойчивости к хлорамфениколу cat, и клетки приобретают этот признак. Индукция профага приводит к образованию фаговых частиц, трансдуцирующих эту плазмиду и ассоциированный с ней признак устойчивости к хлорамфениколу. Интеграция плазмиды SP? в бактериальную хромосому происходит по механизму гомологичной рекомбинации с участием гена recE. Способность к интеграции в бактериальную хромосому обнаруживают и другие плазмиды, содержащие фрагменты хромосомной ДНК клеток-хозяев, что продемонстрировано, в частности, для плазмид E. coli и Streptococcus pneumoniae. Интегрирующие векторные системы, в которых используется тот же принцип гомологичной рекомбинации, разработаны и для эукариотических клеток, включая клетки животных и растений. В результате такие работы привели к развитию целого направ- 161 ления исследований по созданию трансгенных животных и растений, стабильно наследующих и экспрессирующих гены, искусственно введенные в их геном. Наличие феномена гомологичной рекомбинации между хромосомной ДНК клетки-хозяина и векторной ДНК, содержащие гомологичные хромосомной ДНК клетки-хозяина последовательности нуклеотидов, приходится учитывать при получении соответствующих генно-инженерных конструкций. Такая неконтролируемая рекомбинация в большинстве случаев нежелательна, т. к. может приводить к потере или к структурным перестройкам клонированных фрагментов ДНК. Чтобы свести последствия этого явления к минимуму, используют специальные штаммы клеток-хозяев, в которых общая система рекомбинации не функционирует, напр., вследствие мутационной инактивации гена recA E. coli или recE B. subtilis. Векторы космидные * вектары касмідныя * cosmid vectors – векторы, сконструированные на основе плазмид с генетическими элементами фага ?, отвечающими за упаковку ДНК в фаговой частице, обладают большей клонирующей способностью по сравнению с плазмидными векторами. Векторы на основе нитевидных фагов * вектары на аснове ніткападобных фагаў * filose phages based vectors – при клонировании и амплификации в векторных плазмидах или производных фага ? чужеродные фрагменты ДНК находятся в двухцепочечной форме. Однако в ряде случаев, напр. при гетеродуплексном анализе, определении последовательности нуклеотидов, выделении комплементарной РНК, направленном мутагенезе и некоторых др., необходимо манипулировать с одной цепью ДНК. При этом приходится разделять цепи ДНК, что не всегда достаточно просто сделать. Поэтому клонирование ДНК в одноцепочечных векторах является привлекательным объединением в одном эксперименте процедур изолирования целевой последовательности ДНК, ее ампли-